細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)成為當(dāng)今生命科學(xué)各領(lǐng)域的基礎(chǔ)技術(shù)和基本技能，它也是細(xì)胞工程、基因工程和生物醫(yī)學(xué)工程的重要研究手段。那我們?cè)趯?shí)際的動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中需要注意哪些基本要求呢？

1、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

實(shí)驗(yàn)前必須分門別類地制訂操作卡片，如清洗卡、消毒卡、細(xì)胞常用液（細(xì)胞培養(yǎng)液、BSS液、消化液）配制卡、牛血清檢測(cè)分裝卡、細(xì)胞原代和傳代操作卡等。各卡片上注明實(shí)驗(yàn)所需器材的名稱、規(guī)格、數(shù)量、操作要領(lǐng)和實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)等。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)按卡片收集、清點(diǎn)所需用品，一并放入超凈臺(tái)內(nèi)，這樣可避免操作時(shí)因物品不全而往返拿取所浩成的污染。同時(shí)，根據(jù)每個(gè)實(shí)驗(yàn)的要求，準(zhǔn)備好瓶管支架器械消毒盒等。實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)數(shù)要大于實(shí)驗(yàn)使用數(shù)，瓶蓋數(shù)要大于瓶數(shù)。這樣才能有條不紊地做實(shí)驗(yàn)，也減少了忙亂操作所引起的污染。

2、無菌室和操作室消毒

無菌室內(nèi)每周用乳酸蒸氣（或過氧乙酸）加紫外線消毒1~2次。實(shí)驗(yàn)前，將實(shí)驗(yàn)器材放入超凈臺(tái)內(nèi)，打開超凈臺(tái)紫外線燈，同時(shí)啟動(dòng)超凈臺(tái)風(fēng)機(jī)，40 min后消毒完畢，關(guān)閉紫外線燈。這樣，超凈臺(tái)內(nèi)空氣被凈化，超凈臺(tái)面構(gòu)成相對(duì)無菌的環(huán)境。

3、無菌操作要求

①手指不能觸及器材使用端。如觸及，器材需更換或燒灼后再使用（如瓶口）。

②減少手與器材的接觸面，學(xué)會(huì)手指操作。

③一切操作，如打開或封閉瓶口，安裝吸管、注射器等，都要在火焰前方進(jìn)行。瓶口、吸管、注射器使用前要經(jīng)過火焰消毒后使用。

④瓶口順風(fēng)斜放在支架上。試劑用后立即封閉瓶口。瓶口長(zhǎng)時(shí)間敞開會(huì)增加落菌的機(jī)會(huì)。

⑤不同的細(xì)胞同時(shí)操作時(shí)，要專管專用，并要勤換吸管，防止擴(kuò)大污染和交叉污染。

⑥瓶口液滴不能倒回瓶?jī)?nèi)。液滴用干酒精棉球擦拭，瓶口再經(jīng)火焰消毒。

⑦操作者動(dòng)作要準(zhǔn)確敏捷，盡量避免空氣流動(dòng)。

4、實(shí)驗(yàn)中操作要求

洗手、著裝與外科臨床要求相同。雙手用肥皂洗凈后浸泡于消毒液中，并用75%的酒精擦拭。細(xì)胞培養(yǎng)用液從冰箱取出，試劑瓶口和外壁經(jīng)灑精外布擦洗后人超凈臺(tái)，超凈臺(tái)面要用酒精紗布擦拭。超凈臺(tái)上的物品面布局合理，污染廢液缸、酒精棉球缸在右側(cè)位，酒精燈在中央位，試劑瓶在左側(cè)位。拆除大包裝，點(diǎn)燃灑精燈（95%灑精）、火焰無色或微黃色表示酒精雜質(zhì)少，酒精燃燒wan全（不能使用廢酒精或工業(yè)酒精，這類酒精燃燒時(shí)產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì)易附著到吸管或其他瓶、皿上，帶入培養(yǎng)液中會(huì)傷害細(xì)胞）。

浸泡75%酒精中的金屬器械用臺(tái)面消毒鑷子取出，經(jīng)無菌干紗布擦拭后，迅速通過火焰（器械不能在火焰中灼燒過長(zhǎng)時(shí)間），冷卻后使用，避免燙傷細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)液、牛血清、酶液的吸管，使用后不能再用火焰消毒，因?yàn)槲苤袣埩舻呐囵B(yǎng)液被燒焦碳化，再使用時(shí)，會(huì)把有害碳化物帶入培養(yǎng)液中毒害細(xì)胞。操作中手指被污染時(shí)，可用酒精紗布或棉球擦拭。在實(shí)驗(yàn)過程中，不要面向操作臺(tái)講話或咳嗽，避免將唾沫中微生物帶入超凈臺(tái)內(nèi)，污染空氣。實(shí)驗(yàn)者離開超凈臺(tái)時(shí)，立即用肘關(guān)節(jié)關(guān)閉側(cè)窗口，避免無菌室內(nèi)細(xì)菌隨空氣流入凈化操作區(qū)。

5、實(shí)驗(yàn)后要求

實(shí)驗(yàn)完畢，關(guān)閉超凈臺(tái)風(fēng)機(jī)和電源，未使用過的器材放入飯盒內(nèi)，用過的玻璃器材投入清水中浸泡，包裝紙疊卷，繩成束分類歸人，最后，超凈臺(tái)面用酒精紗布或棉球擦拭，紫外線消毒。

6、注意事項(xiàng)

無菌操作離不開火和酒精，操作中避免事故發(fā)生。要用打火機(jī)點(diǎn)火?；鸩顸c(diǎn)火時(shí)，火星熄滅后投入廢缸內(nèi)（缸內(nèi)有廢酒精棉球）。酒精濺出臺(tái)面或瓶外壁時(shí)，立即擦干；一旦發(fā)生著火事故，立即關(guān)閉超凈臺(tái)風(fēng)機(jī)，用飯盒、濕布撲滅火焰。