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TRIzol RNA提取試劑盒操作說明
點(diǎn)擊次數(shù):328 更新時(shí)間:2024-11-05

TRIzol RNA提取試劑盒其操作方便、快捷。 在TRIzol中,RNA是隔離在RNA酶污染之外的。而對樣品的后續(xù)操作會(huì)要求用無RNA 酶的非一次性的玻璃器皿或塑料器皿。玻璃器皿可以在150°C 的烘箱中烘烤4小時(shí)。塑料器皿可以在0.5 M NaOH 中浸泡10 分鐘,用水徹di漂洗干凈后高壓滅菌備用。

(一)試劑準(zhǔn)備

1.TRIzol試劑。

2.氯仿

3.異丙醇

4.75%乙醇(DEPC H2O配制)

5.DEPC H2O

(二)操作步驟

1. 樣品處理:

(1)培養(yǎng)細(xì)胞:收獲細(xì)胞1-5×107,移入1.5ml離心管中,加入1ml Trizol,混勻,室溫靜置5min。

(2)組織:取50-100mg組織(新鮮或-70℃及液氮中保存的組織均可)置1.5ml離心管中,加入1ml Trizol充分勻漿,室溫靜置5min。

2.加入0.2ml氯仿,振蕩15s,靜置2min。

3.4℃離心,12000g×15min,取上清。

4.加入0.5ml異丙醇,將管中液體輕輕混勻,室溫靜置10min。

5.4℃離心,12000g×10min,棄上清。

6.加入1ml 75%乙醇,輕輕洗滌沉淀。4℃,7500g×5min,棄上清。

7. 晾干,加入適量的DEPC H2O溶解(65℃促溶10-15min)。

(三)注意事項(xiàng)

1.樣品量和Trizol的加入量一定要按步驟(1)的比例,不能隨意增加樣品量或減少Trizol量,否則會(huì)使內(nèi)源性RNase的抑制不wan全,導(dǎo)致RNA降解。

2.實(shí)驗(yàn)過程必須嚴(yán)格防止RNsae的污染。

二、總RNA定量

RNA定量方法與DNA定量相似。RNA在260nm波長處有最大的吸收峰。因此,可以用260nm波長分光測定RNA濃度,OD值為1相當(dāng)于大約40μg/ml的單鏈RNA。如用1cm光徑,用 ddH2O稀釋DNA樣品n倍并以ddH2O為空白對照,根據(jù)此時(shí)讀出的OD260值即可計(jì)算出樣品稀釋前的濃度:

RNA(mg/ml)=40×OD260讀數(shù)×稀釋倍數(shù)(n)/1000

RNA純品的OD260/OD280的比值為2.0,故根據(jù)OD260/OD280的比值可以估計(jì)RNA的純度。若比值較低,說明有殘余蛋白質(zhì)存在;比值太高,則提示RNA有降解。

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